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問:結(jié)核感染T細(xì)胞免疫斑點(diǎn)實(shí)驗(yàn)的原理是什么?
從全血樣本中分離出外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMCs),與結(jié)核桿菌特異性抗原一起孵育,當(dāng)外周血中存在針對(duì)結(jié)核桿菌的效應(yīng)T淋巴細(xì)胞時(shí),結(jié)核桿菌特異性抗原將刺激這些效應(yīng)T淋巴細(xì)胞分泌IFN-γ。分泌的細(xì)胞因子被預(yù)包被在反應(yīng)孔膜上的特異抗體捕獲,細(xì)胞和其它不必要的物質(zhì)通過洗滌被去除。加入生物素標(biāo)記的檢測(cè)抗體與被捕獲的IFN-γ結(jié)合,辣根過氧化物酶通過親和素與生物素特異性結(jié)合,顯色底物溶液在反應(yīng)部位被酶分解并最終形成斑點(diǎn)。每一個(gè)斑點(diǎn)代表一個(gè)分泌IFN-γ的效應(yīng)T淋巴細(xì)胞。通過對(duì)斑點(diǎn)進(jìn)行計(jì)數(shù)可以判斷體內(nèi)是否存在對(duì)結(jié)核桿菌反應(yīng)的效應(yīng) T細(xì)胞,從而對(duì)結(jié)核病進(jìn)行輔助診斷。 -
問:試劑盒所使用的抗原與其他同類產(chǎn)品有什么區(qū)別?
產(chǎn)品包含了CFP-10,ESAT-6及Rv3615c肽庫三種不同類型的抗原,使用時(shí)三種抗原與標(biāo)本中的單個(gè)核細(xì)胞(PMBC)加入同一個(gè)測(cè)試孔中,這項(xiàng)技術(shù)也獲得了國家發(fā)明專利授權(quán)(專利號(hào)ZL 2012 I 0090659.1),是目前國內(nèi)外獨(dú)有的檢測(cè)抗原組合體系。 -
問:QB-T結(jié)核分枝桿菌效應(yīng)T細(xì)胞檢測(cè)試劑盒都需要哪一些儀器或試劑?
淋巴細(xì)胞分離液;RPMI 1640培養(yǎng)基;II級(jí)生物安全柜;水平離心機(jī)(降速可調(diào));自動(dòng)血細(xì)胞分析儀(可替換為顯微鏡); 37℃, 5% CO2培養(yǎng)箱;酶聯(lián)斑點(diǎn)分析儀(可替換為顯微鏡或放大鏡)。